Система C2MAP Shimadzu для аналізу клітинних середовищ опис
Система C2MAP Shimadzu для аналізу клітинних середовищ фундаментальних досліджень і розробки технологічних процесів в культурах клітин тварин. Система C2MAP Shimadzu для аналізу клітинних середовищ вимірює зміни компонентів у супернатанті культури в міру розвитку культивування з використанням LC/MS/MS. Ця система може бути використана для широкого спектру застосувань, від фундаментальних досліджень клітинних культур, включаючи плюрипотентні стовбурові клітини (IPS-клітини і ES-клітини), мезенхімальні стовбурові клітини і антитіло-продукують клітини, до масштабування обсягів культури і фактичного розвитку процесу.
Отримати тимчасові профілі зміни до 95 компонентів супернатанта культури.Система C2MAP Shimadzu для аналізу клітинних середовищ може забезпечити одночасні методи аналізу до 95 компонентів, що робить її придатною для компонентного аналізу для визначення росту клітин і якості стану. Спеціальне програмне забезпечення C2MAP TRENDS viewer може відображати зміни компонентів в різних умовах для полегшення порівняльного аналізу.
Оптимізація умов культури.
Система може забезпечити корисну інформацію для оптимізації умов культивування в культурах тварин клітин шляхом моніторингу споживання і виснаження компонентів середовища під час культивування, а також зміни метаболітів, що секретуються з клітин.
Особливості системи C2MAP.
1. Автоматизований процес від попередньої обробки до вимірювання для аналізу.
З автоматизованим процесом від попередньої обробки до вимірювання, автоматичний аналіз може бути виконаний в нічний час і в неробочі дні.
Робочий процес вимірювання може бути вибраний відповідно до фактичної культури.
безшовні аналіз і управління від pretreatment до вимірювання LC/MS/MS можна виконати.
Попередньо оброблені зразки автоматично поміщаються на мікропланшет, що полегшує повторне вимірювання.
2. Підтримує широкий діапазон вимірювальних з'єднань і зразків супернатанта культури.
в цілому 95 компонентів, включаючи основні компоненти базальних поживних середовищ для тварин клітин і секретованих метаболітів, можуть бути одночасно проаналізовані з високою швидкістю.
Застосовується до широкого спектру клітинних поживних середовищ.
(iPS-клітин, ЕС клітин, мезенхімальних стовбурових клітин, Т-клітин, і клітин чо).
3. Візуалізація варіацій компонентів в культуральних середовищах.
Тимчасові зміни в компонентах можна відобразити у вигляді графіків тренда.
Результати в різних експериментальних умовах можуть бути накладені на дисплей, що дозволяє проводити порівняльний аналіз.
Оптимізація культурних процесів і масштабування обсягів культури.
Відбирали супернатант культури після заміни живильного середовища на недиференційовані клітини ІПС людини. Потім за допомогою системи C2MAP здійснювали моніторинг тимчасових змін компонентів супернатанта культури. Результати показали, що гіпоксантин і деякі інші компоненти були виснажені з 2-го дня або пізніше, незважаючи на щоденну заміну поживних середовищ. Крім того, результати показали, що аспарагін, пантотенова кислота, фолієва кислота і піридоксин підтримували в основному однакову інтенсивність сигналу протягом усього періоду культивування, що говорить про те, що вони не легко споживаються клітинами. За допомогою багатокомпонентного моніторингу компонентів супернатанта культури можна отримати інформацію про те, які компоненти кращі і споживаються клітинами, а які виснажуються протягом періоду культивування. Ця інформація дозволяє отримати корисні відомості про оптимізацію складу культурного середовища і культурного процесу.
Система C2map Shimadzu для аналізу клітинних середовищ була використана для порівняння тимчасових змін компонентів супернатанта культури в недиференційованих клітинах ІПС людини і моделі клітин, відхилених від недиференційованого стану (цитокіни додавалися в недиференційованих умовах культури для індукування диференціювання різних шарів зародка). В результаті вдалося знайти з'єднання, що вказують на характерні Тимчасові зміни в кожній моделі. Такі сполуки можуть стати маркерними кандидатами для використання в управлінні процесами культури.
Якісний аналіз базальних поживних середовищ/добавок поживних середовищ.
Відомо, що різниця в добавках поживних середовищ впливає на результати культивування. У наведеному нижче прикладі різні типи модифікованого середовища Eagle фірми Dulbecco (DMEM) були проаналізовані методом LC-MS/MS. у наступній таблиці показані відмінності в складі поживних середовищ DMEM, зазначені в каталозі продукції.
Результати аналізу відповідають змісту, вказаному в каталозі продукції. При отриманні поживних середовищ та іншої сировини важливо підтвердження наявності компонентів, які вони повинні містити, для отримання стабільного речовини. Крім того, створення калібрувальних кривих з використанням стандартних продуктів дозволяє також кількісно визначати концентрації, тому система C2MAP може бути застосована для кількісного аналізу поживних середовищ.
Тенденції C2MAP.
Для результатів, отриманих за допомогою LC/MS/MS, Тимчасові зміни в кожному компоненті можуть бути відображені за допомогою спеціального програмного забезпечення перегляду. Аналітики можуть відстежувати зміни метаболітів, що виділяються з клітин і компонентів культурального середовища в процесі культивування, а також відображати графіки порівняння компонентів із зразками з різних серій культур. В результаті можна спостерігати споживання і виснаження компонентів культурального середовища, а також зміни в кількості метаболічних компонентів, що виділяються з клітин, що дозволяє отримати корисну інформацію для розгляду оптимальних умов культивування і оцінки клітинного статусу.
Тимчасові зміни вимірюваних компонентів.
порівняння вимірюваних компонентів між різними культурними рядами.
Система C2MAP Shimadzu особливості
Автоматизований модуль попередньої обробки для аналізу клітинних поживних середовищ.
— До 65 зразків можна попередньо обробити автоматично.
— Зонд для зразка супернатанта культури ((3) зонд зразка) і зонд для внутрішнього стандарту і органічного розчинника, використовуваного в якості агента депротеїнізації ((4) зонд реагенту), розділені, обмежуючи перехресне забруднення між зразками.
— Все, від попередньої обробки до аналізу, може бути виконано за допомогою загального ідентифікатора зразка.
— У контрольній програмі прогрес попередньої обробки та аналізу легко підтверджується.
— Можна вибрати оптимальний робочий процес
Система C2MAP Shimadzu для аналізу клітинних середовищ підтримує два режими: пакетний режим (зазвичай використовуваний), в якому пріоритет віддається попередній обробці поміщених зразків супернатанта культури, і послідовний режим, в якому попередня обробка і аналіз виконуються по черзі для кожного зразка.
Пакет методів LC/MS/MS для профілювання клітинних культур
— Забезпечує одночасний аналіз умов для 95 компонентів;
— Дозволяє проводити одночасний аналіз протягом 17 хвилин;
— Пакет методу LC/MS/MS для первинних метаболітів;
— Iонна пара або метод колонки PFPP;
— Бібліотека LC/MS/MS MRM для профілювання фосфоліпідів;
— Бібліотека націлена на фосфоліпіди, що містять жирні кислоти С14 по С22, і включає в себе МРМ-переходи для 867 компонентів. Ця бібліотека дозволяє виконувати профілювання фосфоліпідів шляхом проведення початкового аналізу з використанням методу класифікації фосфоліпідів. За цим слідує створення методу визначення складу жирних кислот на основі піку фосфоліпідів, виявленого в першому аналізі, і подальше використання цього методу для виконання другого аналізу для визначення складу жирних кислот.
— Пакет методів LC/MS/MS для ліпідних медіаторів.
— Негативна іонізація ESI зазвичай використовується для вимірювання жирних кислот, але у випадку важливих ліпідних медіаторів, таких як анандамід, краща позитивна іонізація ESI, оскільки досягається більш висока чутливість. Традиційний LC/MS обмежується аналізом однієї полярності, але технологія UFMS Shimadzu дозволяє LCMS-8050 виконувати високошвидкісне перемикання полярності за 5 мс, що дозволяє аналізувати кілька класів аналітів в одному запуску без втрати якості даних.
— програмне забезпечення для багатовимірного аналізу, що підтримує дані MRM.
програмне забезпечення Traverse MS data analysis призначене для високошвидкісної обробки даних МРМ, отриманих за допомогою систем Shimadzu triple quadrupole LCMS в області цільової метаболоміки. Використовуючи кілька зразків і кілька компонентів, програмне забезпечення здатне створювати графічний і статистичний аналіз для аналізу метаболічних шляхів.
